点击展开
一、 模式实验动物比格犬
Q1:比格犬具体的界门纲目科属种?该品系基因序列是否都测过?与人的基因比较情况?
A1:犬属于哺乳纲,食肉目,犬科、犬属、灰狼种(亚种为家犬)动物,其基因组已经全部测序完成。比格犬基因组数据完整,基因稳定且遗传性疾病很少,试验结果较为准确可靠。基因对比须根据具体所选疾病模型和具体基因来与人的相应基因进行同源性比对。
Q2:比格犬的交配方式?性成熟时间?妊娠时间?什么时间断奶?
A2:目前比格犬通过自然交配的方式,比格犬8~10个月性成熟,春秋季节集中发情。妊娠期平均60天,哺乳期约60天。
Q3:常规实验比格犬什么月龄适合做实验?大概重量?误差在多少范围内实验的一致性能得到保证?
A3:毒性试验一般多选取6-12月龄犬开展试验,体重应控制在平均体重20%以内,如药代试验可推荐选体重9-11kg。药效学试验或建疾病模型需要根据药物或模型特性选择年龄或体重。
Q4:比格犬常规饲养,正常一窝能生几只?一窝生完后,多长时间可以生下一窝?
A4:比格犬一般产仔4-6只;生完一窝后大约6-8个月可发情配种。比格犬一般是2年生3窝。
Q5:实验中常见的犬类疾病有哪些?可能存在的人畜共患病有哪些?
A5:实验过程中常见的犬类疾病有手术或运动中造成的外伤,运输过程中造成的应激性疾病,饲喂不当造成的消化道疾病和养殖环境不卫生造成的感染性疾病;可能存在的人畜共患病有狂犬病(公司售出的犬均会进行狂犬病、犬瘟热等烈性传染病疫苗注射)、布氏杆菌病(可能性极低)及真菌、寄生虫等引起的感染性疾病。
Q6:实验过程中如果被狗咬伤,应急措施?出售的比格犬的洁净度能否确保客户被狗咬了不发生狂犬病?
A6:首先,比格犬是非常温顺的犬,且不记仇、耐疼痛刺激。其次,实验人员会穿实验服,戴手套进行身体防护。但实验过程中也难免出现人员划伤等情况。遇到有伤口出现,按照公司应急处置预案,立即行伤口清理,用大量水清洗。再用碘伏处理伤口,并立即就近医院按要求程序注射狂犬疫苗和破伤风疫苗。公司出售的比格犬均会进行狂犬疫苗的注射,但为了客户的安全,仍推荐意外被犬咬伤或抓伤之后及时注射狂犬疫苗。
Q7:犬作为生物医学的动物模型的优势在哪里?在免疫学,基因组学,生理学方面有哪些相似性?
A7:比格犬性格温顺,配合度高,易于实验操作且重复性好。基因犬是人类最早驯化的动物,犬与人类有3万余年长期驯化。逐渐与人类的生活环境、饮食习惯基本趋于相同,因此家犬与人类在消化代谢、神经系统等解剖结构、生理功能方面存在着显著的趋同进化。犬的社会认知和情感发育方面已经达到了人类婴幼儿水平。另外犬犬约有450种自发基因遗传性疾病,由于在功能、代谢、结构方面与人的相似性,其临床表现与人类的遗传性疾病非常相似。
Q8:①. 犬的行为范式有哪些,我们如何确保人员进行犬行为学实验进行。②. 我们目前有哪些犬的行为学仪器。③. 犬的脑图,犬的脑定位仪器。④. 打过激素超排的犬会不会行为学实验有影响?
A8:①. 犬的行为范式试验:犬犬三箱实验,犬犬单箱实验,犬认知实验,人犬求助实验,人犬饲养笼社交实验,人犬空场社交实验,犬跑步机实验,犬爬楼梯实验,犬睡眠与活动分析实验等。②. 我们目前有哪些犬的行为学仪器:犬睡眠与活动分析仪,三箱轨迹分析,犬跑步机等。③. 犬脑解剖图可上网查询(我们也能提供相关资料)。④. 我们的犬不采用激素超排,故不用担心其影响试验。
二 、基因编辑动物模型
Q1:基因编辑犬常规的构建方法是什么?大概周期?交付标准?
A1:基因编辑犬的构建方法可分为胞质注射和体细胞克隆两种。正常的试验周期为1年(包括载体构建,细胞筛选,克隆构建,动物繁殖等)。交付标准(1年为限):可交付的实验动物为结束基因编辑验证(可附报告)的F0代基因编辑犬2只(约为1月龄)。如客户需要的犬月龄较大,须顺延时间(签订代养或寄样合同)。
Q2:基因编辑犬是否可以用体细胞克隆的方法构建?有什么优势?缺点在哪里?
A2:基因编辑犬的构建方法可分为胞质注射和体细胞克隆两种。相对于胞质注射,体细胞克隆所获得的基因编辑个体基因型较一致,遗传更为稳定且可以选择克隆犬的性别,但其成本较胞质注射高。
Q3:常规基因编辑方法获得纯合子比格犬时间?克隆方法获得纯合子比格犬时间?
A3:通常情况下胞质注射方式获得纯合子需要两世代繁育(F2代),克隆获得纯合子需要1年或者两世代繁育。
Q4:基因编辑犬构建周期?获得的F0代数量?能否确保有公有母?后续如果F0代繁殖不下去怎么处理?
A4:一般获得F0代基因编辑犬周期为1年,数量为2只。胞质注射不确保性别,体细胞克隆可以选择性别(所选基因编辑后不引起性别差异的情况下)。根据实际情况,如因所选基因影响F0代不能繁育,公司不承担相关责任(按合同内容执行);如因基因编辑后无生殖系嵌合导致不能繁育,可协商另做。
Q5:公司可以做的基因编辑犬的种类有哪些?转基因、基因敲除、基因插入、点突变是否都可以做?是否有其他类型?
A5:目前转基因、基因敲除、基因插入、点突变均可以实现。暂时没有其他类型。
Q6:公司利用cas9技术进行基因编辑?关于cas9的脱靶问题如何解决?
A6:基因敲除、插入是基于CRISPR/Cas9技术实现,我们交付给客户的产品是经过脱靶分析,检测到未脱靶的个体。
Q7:胞质注射方式和动物克隆技术的差异?胞质注射方式难点在哪里?
A7:胞质注射,mRNA注射受精卵获得基因编辑动物,F0代为嵌合体动物,基因型需待动物生产后检测,基因型未知,不能筛选性别,有非生殖系嵌合风险;动物克隆采用体细胞核移植方式制备,F0代基因型与供体细胞相同,可以选择性别,可稳定遗传。胞质注射对人员技术要求高,且其效率较低,获得多为嵌合体。
Q8:公司目前可做的基因编辑动物有哪些?
A8:目前可以构建的基因编辑动物有犬、猪、兔子、大小鼠等标准实验动物。
三、 常规实验
Q1:目前可做的常规实验有哪些?
A1:目前能做的常规实验包括常规手术模型,肿瘤模型,糖尿病模型等。
Q2:作为CRO企业,希诺因有哪些优势?
A2:希诺因依托于母公司希诺谷的克隆和基因编辑技术平台,可以提供基因编辑动物模型的CRO服务,也可提供常规实验动物的CRO服务,我们有犬行为学平台,介入手术室,眼科平台,电生理平台等特色平台,可以满足客户的多种实验需求,且可在犬上进行医疗器械安全性和有效性评价。